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氨基酸分析儀檢測透明膠質類中的游離氨基酸

2023-09-27



摘要

本品為Tau、Glu、Gly、Val、Cysteine等5種氨基酸配制而成的透明膠質類物質,使用Biochrom30+全自動氨基酸分析儀,對其所含的游離氨基酸組分及含量進行分析,并了解對該樣品高溫滅菌前后,所含氨基酸的具體影響。結果表明該未知樣中氨基酸各單個氨基酸含量的濃度,及高溫滅菌前后的分別見附頁結果表。

大昌華嘉是一家專注于亞洲地區(qū),在市場拓展服務領域處于領先地位的集團。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費品、醫(yī)藥保健、特色原料、科技事業(yè)領域的業(yè)務。大昌華嘉的服務范圍包括采購、市場研究與分析、市場營銷與銷售、配送與物流以及售后服務。公司在瑞士證券交易所上市,在全球35個市場營運,擁有33,000名專業(yè)員工, 2018年銷售凈額為113億瑞士法郎。大昌華嘉于1865年成立,憑借深厚的瑞士傳統(tǒng)背景,公司在亞洲開展業(yè)務歷史悠久, 深深植根于亞太地區(qū)的社會和企業(yè)界。大昌華嘉科技事業(yè)部專注于為特定的行業(yè)應用領域提供全面的解決方案。2018年該業(yè)務單元擁有1,220名員工,凈銷售額為4.121億瑞士法郎。    

大昌華嘉(大昌洋行(上海)有限公司)是一家專注于亞洲地區(qū),在市場拓展服務領域處于領先地位的集團。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費品、醫(yī)藥保健、特色原料、科技事業(yè)領域的業(yè)務。大昌華嘉于1865年成立,憑借深厚的瑞士傳統(tǒng)背景,公司在亞洲開展業(yè)務歷史悠久,深深植根于亞太地區(qū)的社會和企業(yè)界。
大昌華嘉儀器部專業(yè)提供分析儀器及設備,代理眾多歐美先進儀器,產品范圍包括:顆粒,物理,化學,生化,通用實驗室的各類分析儀器以及流程儀表設備,在中國的石化,化工,制藥,食品,飲料,農業(yè)科技等諸多領域擁有大量用戶,具有良好的市場聲譽。我們的業(yè)務逐年增加,市場不斷擴大。大昌華嘉公司在中國設有多個銷售,服務網點,旨在為客戶提供全方位的產品和服務。


一、樣品前處理

1、所用試劑

1.1 Loading Buffer:鋰鹽系統(tǒng),pH 2.2

1.2 磺基水楊酸溶液:取50g磺基水楊酸溶于1L純水中

1.3 乙二胺四乙酸二鈉溶液:取10g EDTA-Na溶于1L純水中

1.4 0.06mol/L 鹽酸:取50mL 鹽酸加水稀釋至10mL,混勻

1.5 5種氨基酸標準品、Cystine單標


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2、前處理設備

1) 分析天平:精度為 0.0001g

2) 移液槍及槍頭

3) 0.22um濾膜

4) 一次性注射器

5) 低范圍pH試紙


3、樣品制備(參考NY/T 1975-2010)

因樣品為透明膠質類物質,且可能含有未知大分子等雜質,故需(參考NY/T 1975)進行除蛋白前處理:

吸取2 mL樣品于10 mL離心管或試管中,準確加人2 mL磺基水楊酸溶液(1.2),混勻,放置1h。準確加入1 mL EDTA-Na溶液(1.3)和1 mL鹽酸溶液(1.4),混勻,離心15 min(或用0.45um的微孔濾膜過濾)。吸取上清液(或濾液)1 mL(測定當前pH,若有需要則可加少許的Loading Buffer (1.1),使氨基酸濃度處于儀器檢測范圍內),移液槍取上述溶液1mL至一次性注射劑,過濾膜,上機待測。


二、分析方法描述(Biochrom 30+)

氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

1) 色譜柱:Biochrom Li型陽離子交換樹脂柱,4.6*20cm

2) 分離程序:

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3) 運行時間:經分析時間+再生時間 168.15min

4) 反應單元溫度:135°C。

5) 檢測波長:570nm、440nm同時檢測。

 

三、樣品中氨基酸含量的計算

樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算:

C= Cs/As × Ai× F ················· (1)式中:

Ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Cs ———氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

A———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;

F ———樣品稀釋倍數(shù)。


附:透明膠質類物質中,高溫滅菌前后比較的游離氨基酸,分析圖譜及做樣結果:

由結果可知:高溫滅菌之后的游離氨基酸含量,相較于滅菌前會有少許提升。這是由于滅菌前的樣品中可能含有的少許干擾物質或雜菌,存在經過高溫滅菌等的處理會被破壞,釋放少許的氨基酸的可能,屬合理正常現(xiàn)象。


圖1.  樣品A--滅菌前—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine

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圖2.  樣品B--滅菌后—Tau、Glu、Gly、Val+Cystine

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