2021-02-08
摘要：
以花鯧為原料，使用Biochrom30+全自動氨基酸自動分析儀對其肌肉的氨基酸組成進行分析。結果表明花鯧肌肉中氨基酸總量的質量百分比為14443.578mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的39.59%，鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.73%。
樣品前處理
所用試劑
濃鹽酸，濃度≥36%,優級純
6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。
水：去離子水
苯酚：須重蒸
17種氨基酸標準品
行號 | 氨基酸 | 行號 | 氨基酸 | ||
1 | Asp | 天冬氨酸 | 2 | Thr | 蘇氨酸 |
3 | Ser | 絲氨酸 | 4 | Glu | 谷氨酸 |
5 | Pro | 脯氨酸 | 6 | Gly | 甘氨酸 |
7 | Ala | 丙氨酸 | 8 | Cys | 胱氨酸 |
9 | Val | 纈氨酸 | 10 | Met | 蛋氨酸 |
11 | Ile | 異亮氨酸 | 12 | Leu | 亮氨酸 |
13 | Tyr | 酪氨酸 | 14 | Phe | 苯丙氨酸 |
15 | His | 組氨酸 | 16 | Lys | 賴氨酸 |
17 | Arg | 精氨酸 | |||
前處理設備
分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。
水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL
勻漿機。
無油真空泵
干浴水解濃縮儀
移液管
0.22um濾膜
樣品制備（參考國標GB 5009.124-2016）
原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內臟，采肉后清洗、瀝干，在勻漿機中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷凍保存，分析時取出解凍后使用。
試樣水解
稱取含蛋白7.5-25mg的試樣，加入水解管中，加入15mL 6mol/L鹽酸，繼續向水解管內加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮氣,重復抽真空-充入氮氣3次后,在充氮氣狀態下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中，110°C水解22-24h，冷卻、混勻、開管、轉移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取適量樣液，在干浴水解濃縮儀中50°C吹干，必要時加入少許水，重復吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀釋上機用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉移至儀器進樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用。
分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀分析方法參數：
色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6´20cm
分離程序：
NO. | Time | Temp | Buffer | Pump | Nin | Rec | Commands |
1 | 01:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | |
2 | 00:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | Reset |
3 | 01:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | Load |
4 | 06:40 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | ON | |
5 | 13:00 | 52 | 2 | 35.0ml/h | ON | ON | |
6 | 01:00 | 52 | 5 | 35.0ml/h | ON | ON | |
7 | 16:00 | 95 | 5 | 35.0ml/h | ON | ON | |
8 | 04:00 | 95 | 6 | 35.0ml/h | ON | ON | |
9 | 04:00 | 95 | 1 | 35.0ml/h | ON | ON | |
10 | 09:00 | 48 | 1 | 43.0ml/h | OFF | OFF | |
11 | 02:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | |
End |
運行時間：經分析時間+再生時間 57min
反應單元溫度：135°C。
檢測波長：570nm、440nm同時檢測。
樣品中氨基酸含量的計算
樣品測定液氨基酸的含量按式(2)計算:
ci = cs /As ×Ai ……………………(2)
式中:
ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;
As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;
cs ———氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。
試樣中各氨基酸的含量按式(3)計算:
Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)
式中:
Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);
ci ———試樣測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
F ———稀釋倍數;
V ———試樣水解液轉移定容的體積,單位為毫升(mL);
M ———氨基酸i的摩爾質量,單位為克每摩爾(g/mol);
m ———稱樣量,單位為克(g);
109 ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數;
100 ———換算系數。
附、花鯧分析圖譜及做樣結果
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